| 产品描述 | Carfilzomib (PR-171)是一种不可逆proteasome抑制剂，在ANBL-6细胞中IC50为<5 nM，在体外优先抑制β5亚基的ChT-L活性，对PGPH和T-L活性很弱或没有作用。 |
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| 靶点 | Proteasome [1](ANBL-6 cells)5 nM |
| 体外研究 | Carfilzomib抑制多种细胞系和源自患者的肿瘤细胞的增殖，包括多发性骨髓瘤。Carfilzomib诱导内在和外在的凋亡信号传导途径并激活c-Jun N-末端激酶(JNK)。与bortezomib相比，Carfilzomib协同地塞米松(Dex)表现增强的抗MM活性，并克服了bortezomib等药物的抗性。 Carfilzomib有选择地抑制β5亚基的CHT- L活性，在10 nM剂量时抑制超过80％的活性。低剂量Carfilzomib短期处理导致优先结合特异性的β5组成20S蛋白酶体和β5i免疫蛋白酶体亚基。在Carfilzomib刺激的ANBL -6细胞中检测caspase活性，结果显示caspase- 8和caspase -9和caspase-3活性在8小时后大幅增加，和对照8小时后的细胞相比分别增加了3.2 ， 3.9和6.9倍。在carfilzomib处理过的细胞中，线粒体膜的完整性减少到41%(Q1 + Q2)，而在对照细胞中这一比例为75％。 在另一项研究中，Carfilzomib也表现出对血液和实体肿瘤的临床前有效性。 Carfilzomib直接一直破骨形成和骨吸收。 |
| Cell Data | Cell LinesAssay TypeConcentrationIncubation TimeFormulationActivity DescriptionPMIDMM.1SGrowth Inhibition Assay0-100 nM48 hIC50 = 10 nM25312543NCI-H929 Growth Inhibition Assay0-100 nM48 hIC50 = 14 nM25312543SUDHL16 Apoptosis Asssay2.5–3.5 nM48 henhances the cell death co-treatment with ACY121525239935... Click to View More Cell Line Experimental Data |
| Assay | MethodsTest IndexPMIDWestern blotpERK / ERK / pSTAT5 / STAT5 / pPI3K / PI3K; caspase-9 / caspase-8; c-PARP / PARP / caspase-3; Bcl-2 / Bcl-Xl / Mcl-1 / Bik / Bim / Bax / Bak; Atg5 / Atg12 / Beclin-1 / LC3-II; Noxa / Bik / Puma / Mcl-1; EGFR / HER2 / ER alpha / p-Akt(Ser473) / Akt / p-ERK / ERK / p53; BDP1 / HER2(Tyr1248) / HER2(Tyr1221/Tyr1222) / PARP1 / caspase-7 / p53 Mut; HLA class I; 24590311 22929803 25548100 29069787 26323098Growth inhibition assayCell viability; 27655642 |
| 体内研究 | Carfilzomib适度降低了体内异种移植物模型中肿瘤的生长。在持续或短暂处理下， Carfilzomib有效地降低多发性骨髓瘤细胞活力。 Carfilzomib增加骨小梁体积，减少骨吸收，并提高非肿瘤小鼠的骨形成。[3] |
| 激酶实验：[1] | - 合并 酶联免疫吸附试验分析carfilzomib亚基: ANBL -6细胞（2 ×106/孔）接种于96孔板中并用Carfilzomib（0.001至10μM）处理 1小时。然后将细胞裂解（20mM的Tris-HCl， 0.5 mM EDTA），并裂解物上清转移到聚合酶链反应（PCR）平板上。使用起始浓度为6 μg/μL处理ANBL - 6细胞得到的裂解物做标准曲线。活性位点探针[生物素-(CH2)4-Leu-Leu-Leu-环氧酮; 20 μM]加入并于室温温育1小时。在细胞裂解液中添加1％十二烷基硫酸钠（SDS）和加热至100℃变性 ，随后在96孔的多屏DV板中每孔和20μL链霉亲和琼脂糖高性能珠混合并孵育1小时。这些珠粒用酶联免疫吸附试验(ELISA)缓冲液（PBS，1％牛血清白蛋白和0.1 ％吐温-20）洗涤细胞，并温育过夜，在4℃在板振荡器上与抗体的蛋白酶体亚基反应。所用抗体包括鼠单克隆抗- β1 ，抗-β2 ，抗β1i和抗β5i ，山羊多克隆抗β2i ，和兔多克隆抗- β5 （针对KLH- CWIRVSSDNVADLHDKYS肽亲和纯化的抗血清）。珠粒洗涤后用以辣根过氧化物酶标记的二羊抗兔，羊抗鼠或兔antigoat抗体温育2小时。洗涤后，将珠粒用SuperSignal ELISA picochemiluminescence底物反应，而后进行荧光检测。荧光信号通过与标准曲线比较转换为μg/mL，表示为抑制相对于对照的％。使用以下nonsigmoidal剂量 - 反应方程生成拟合曲线：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1 + 10̂((LogEC50 − X) × HillSlope))，其中X是浓度的对数， Y是抑制％，EC 50是表示50％的效果的剂量。 |
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| 细胞实验：[1] | - 合并
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| 动物实验：[4] | - 合并
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